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辣根过氧化物酶 HRP 货号:SP91075

中文名: 辣根过氧化物酶 HRP 货号:SP91075

英文名:

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相关类别:   二抗

货号:   SP91075

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发布时间:   2024-04-23 15:17:36

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相关信息

有效期5年
溶解性10 mg/mL in water
来源From horseradish
别名Donor: hydrogen-peroxide oxidoreductase;Horseradish peroxidase;HRP POD
英文名称Peroxidase(POD)
CAS9003-99-0
储存条件-20℃
酶活/效价233-300units/mg solid
外观(性状)褐色结晶性冻干粉状
单位
规格   10mg    100mg    1g

说明:POD是一种具有氧化还原酶性质的血红素蛋白。用于生化研究,是酶标记法所用的一种主要酶。也用于生物液体中 葡萄糖和半乳糖的测定


HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,中性糖和氨基糖约占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基,该辅基在403nm波长处有最大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比,也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示HRP制剂的真正纯度,而且RZ值高的HRP制剂,并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1%(W/V)酶溶液吸光度为22.5,浓度为227umol/L]。纯HRP干燥贮存于–20oC可保持稳定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存,可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定,用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0%甲醛水溶液固定做冷冻切片,均不能使其活性改变。氰化物或硫化物在10–5~10–6mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol/L浓度时抑制HRP;HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。
因此,在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如氟化钠、叠氮钠和强酸等作为酶反应的终止剂。此外,在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时,为防止酶失活,应避免使用叠氮钠作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型:①含糖量高的酸性同工酶。②等电点接近于中性(或微碱)的含糖量相对较低的同工酶。③含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP,以PI为8.7~9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分,其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成,血红素基团则位于其间而成夹心结构,糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少;无游离的。—氨基,仅有2个可测出的组氨酸,6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此,HRP一般仅有1~2个可用于耦联的氨基。
根据HRP的催化特性,ELISA中一般使用过氧化氢(H2O2)作为HRP底物之一,在供氢体(即色原底物)存在时,HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4可见,HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I,而复合物I又可与氢供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物,当H2O2过量,由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成,酶活性受抑制(以后补上)。30%的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物,也为其抑制剂,因而ELISA要想得到满意的测定结果,H2O2必须限定在一定的浓度范围内,终浓度通常为2~6 mmol/L。然而在实际研究工作中,一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2~4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30%H2O2贮存液浓度经测定证实确为30%,则稀释10 000—12 000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6,因此,可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。
固相ELISA中,当温度高于20oC时,HRP活性常较低,在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇-20或TritonX-100可延迟HRP的失活,且可使反应温度加大,但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依氢供体的不同而有差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为氢供体,则只能保护20%的酶活性,而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时,酶活性的保护提高至90%。
HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶,主要是因为其一方面易于提取,价格相对低廉;另一方面性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体偶联后,活性很少受损失。


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一、适合客户

1、没有时间和精力完成ELISA实验测定的客户。
2、缺乏ELISA操作经验和技巧的客户。

二、代测指标

除了极少数冻存状态下不稳定的指标外网站上最新列出的所有指标都可以代测,具体请咨询销售。 酶联免疫(ELISA)

项目名称 服务内容 价格
酶联免疫ELISA检测 本公司提供试剂 免费
酶联免疫ELISA检测 自己提供试剂 400/板
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三、样本要求

1、提供拟代测样品情况,包括样品的性质与数量、是否包含重复、有无特殊的化学处理、保存条件与保存时间和测定指标等,特别珍贵的样品请提前声明。
2、按照要求,确保样品标签和数量无误,进行适当包装和寄送,以确保寄送过程中样品不变质。
3.我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。
4.液体类标本:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 收集样本前须向我司销售人员索要说明书以及具体操作注意事项。

四、寄标本时需注明以下情况:

1、标本编号;2、所测项目;3、是否做复孔;3、联系方式;4、实验后标本是否寄回。

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