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ELISA和WB该如何选择，怎样才能做好ELISA?
发布时间：2021-08-02 10:30:14
近期实验室的大家都不约而同地拼搏在ELISA最前线,ELISA好做么?ELISA是不是什么蛋白都能检测?那能不能不跑WB了?面对这一番提问，突然觉得是时候整理一下关于ELISA的实验技能，以备大家不时之需!
首先ELISA是什么，相信只要本科医学的小伙伴们，就算不知道ELISA是干嘛的，也能答出来抗原抗体反应，ELISA就是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。
一、那么接着一个重要的问题就是，ELISA和WB如何选择
相信这个问题肯定很多人考虑过，其实我们选择的时候只要明白两个实验的优缺点就行。
首先，ELISA抗原抗体都能检测，而WB主要检测的就是抗原。对于ELISA主要的特点就是，使用的抗原或抗体是与某种酶连接成的酶标抗原或抗体，由于酶的催化效率很高，可以放大反应效果，增大检测的灵敏度，因此ELISA的检测限可以达到ng级，但WB显色敏感度一般在pg级。同时ELISA在保证实验稳定有效的前提下，是一个很好的定量实验。对于我们熟悉的WB实验，也有一个非常鲜明的优点就是，可以将不同大小的蛋白进行分离，根据目的蛋白的分子量大小预测位置进行检测，这样我们不仅能够知道检测的蛋白是否是多聚体、降解产物等，也能够同时检测不止一个目的蛋白。
同时我们也应该从样本和目的蛋白种类进行考虑，如果需要检测的目的蛋白是血浆或血清中的分泌蛋白，那么ELISA可能更适合
二、ELISA实验过程中需要注意什么?
1.操作过程需牢记
首先，实验进行前要先将试剂盒从冰箱中 恢复室温 。加样时尽量将液体加入孔底，不要有气泡， 提供一个小 tip! 因为有气泡会影响吸光度值的测定，检测之前可以使用小枪头很容易戳破气泡。洗板时注意不要间隔太久，尽量 避免干板现象!按照试剂盒批号和保质期使用，不同批次的试剂严禁混合使用，同时试剂盒使用后 剩余的孔板一定要和干燥剂一起保存 ，防止潮湿。目的蛋白含量低的样本可以咨询厂家是否可以适当延长孵育时间，使其充分结合。 (严格按照说明时间进行，防止非特异性结合，因此小伙伴们还是要多咨询一下客服! )
2.样本处理
首先对于ELISA来说，正确的处理样本是保证检测准确性和正确性的第一步。
正式实验之前最好使用少量的样本进行预实验，可以选择2、5、10倍稀释样本，选择合适的稀释比例进行实验，亲身经历告诉大家，千万不能图省事，不然浓度太大超过检测限，简直就是赔了夫人又折兵!!!同时，样本的保存也非常重要，保存不当或在冰箱里保存过久的样本，血清中lgG可聚合成多聚体，导致结果偏高。建议五天内检测的血清样本可短暂存放4℃，一周之后测定的血清样本应该低温-80℃冻存，同时切忌反复冻融。如果是血清样本，也要主要样本不能有溶血、脂血和细菌等残留，这些样本中存在非特异性显色影响结果。
3.标准品如何使用？
标准品的配置一般都是按照说明书进行的倍比稀释，那重复使用是否会有影响呢?建议是如果非用不可，那么标准品打开后一定要注意保存，且尽量不要相隔太久。放置一周的标准品，再次使用差别不大，但是放太久的标准品建议狠心丢掉，不要使用。因此小伙伴们设计实验一定要充分，尽量备好样本再进行操作!
三、ELISA数据如何处理
首先我们都知道要做一个标准曲线，那么ELISA的标准曲线是需要我们拟合曲线得到的，有很多软件都是可以直接帮助我们合成曲线并进行样本含量计算的，这里推荐大家几个良心好用的软件，ELISACalc、origin、Curve Exert、ReaderFit等等。
最后，Elisa并不是简单的加样和检测，实验方法的选择也不是图省事，希望小伙伴们都轻松掌握，快乐实验，快乐发paper!
